旋涡混合器提取质粒DNA

更新时间：2013-09-09 点击次数：4525次

从大肠杆茵中提取质粒DNA的方法很多，其中的碱性别方法提取质粒是基于染色体DNA与质粒DNA的变性与复性存在差异而予以分离的。在强碱性条件下，染色体洲A和质粒DNA均变性（双链解开）。由于质粒DNA是共价闭合环状超螺旋结构，变性后两条互补链不会*分开。当溶液pH调节到中性时．质粒DNA容易复性并溶解在溶液中，而染色体DNA不容易复性，互相继绕．在利用台式高速离心机进行离心时极易和蛋白质—3Ds复合物等一起沉淀下来。转移出上演液，再用乙醇沉淀出其中的质粒DNA。具体操作步骤如下：

（1）接种一单菌落于100ml LB液体培养基中，加入50μl的氨芐青霉素，37℃振荡培养8—10h，使培养达到饱和状态。

（2）取1.5ml培养液利用台式高速离心机离心20s，沉淀用100μl GTE悬浮并于室温放置5min。

（3）加入200μl NaOH/SDS溶液，混匀，于冰上放置5min。

（4）加入150μl KAc溶液，在MixMax旋涡混合器上振荡2s，于冰上放置5min。

（5）离心3min，然后吸取0.4ml上清液移入干净的微量离心管中，加入0.8ml无水乙醇，室温静置2min。

（6）室温下通过台式高速离心机进行离心3min，（使用台式高速离心机时一定要注意转速、时间控制以及操作规范）用lml 70％的乙醇洗涤沉淀，然后真空于燥。

（7）沉淀用30μl dd HO溶解，-20℃保存。

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